Hemoglobina A2

Hemoglobina A2
 Objetivo:
En esta práctica vamos a realizar la hemoglobulina A2 por la cual tendremos que preparar un hemolizado, las hemoglobinas son retenidas por unas resinas de intercambio aniónico. La hemoglobina A2 se eluye de forma específica bajo estrictas condiciones de pH y fuerza iónica, cuantificándose por lectura fotométrica
 Materiales:
- Muestra sanguínea recogida con anticoagulante heparina o EDTA
- Microcolumna
- Tubos de ensayo
- Micropipetas
- Hemolizado
- Agua destilada
- Reactivo 1
- Espectofotómetro
 Procedimiento:
1. Pipetear en un tubo de ensayo: 50 μL de sangre y 200 μL de agua destilada.
Agitar y reservar, ya que lo utilizaremos más adelante
2. Destapamos la parte superior de la microcolumna, rompemos a continuación la lengüeta inferior y bajar el disco superior hasta el nivel de la resina, evitando comprimirla, con la ayuda del extremo plano de una pipeta. Dejar gotear hasta que el líquido alcance el nivel del disco, desechando el eluido.
3. Aplicar cuidadosamente sobre el disco superior: 50 μL de hemolizado, dejamos gotear y desechamos el eluido.
4. Cuando haya penetrado todo el hemolizado añadir, procurando arrastrar los posibles restos del mismo: 200 μL de Reactivo (1), dejar gotear y desechar el eluido.
5. Colocar la microcolumna sobre un tubo de ensayo y añadir: 3 mL de Reactivo (1), dejamos gotear y recogemos el eluido (Fracción de HbA2).
6. Agitar bien y leer la absorbancia (A) de la fracción HbA2 a 415 nm frente a agua destilada (AHbA2). La absorbancia es estable al menos durante 6 horas.
7. Pipetear en un tubo de ensayo: 12 mL de agua destilada y 50 μL de hemolizado.
8. Agitar bien y leer la absorbacia (A) a 415 nm frente a agua destilada (AHbtotal). La absorbancia es estable al menos durante 6 horas.


 Resultados:
Tras haber hecho toda esta práctica y al haber leído, nos da los siguientes datos:
Resultado de absorbancia HbA2= 0.044
Resultado de absorbancia Hbtotal=0.452
En vista de estos resultados, hacemos los cálculos necesarios y vemos: (0.044/0.452)X25= 2.43% HbA2

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