CFTH

CFTH

Objetivo:

En esta práctica vamos a realizar la prueba CFTH, que consiste en una precipitación de una muestra para poder ver la capacidad de fijación total del hierro. Aprovechando que la transferrina sérica se satura con un exceso de Fe 3+ y el exceso no fijado se elimina por precipitación con carbonato magnesico, determinándose a continuación la cantidad total de hierro presente.La diferencia entre la capacidad de fijación total de hierro hallada y el hierro sérico inicial nos da la capacidad de fijación de hierro no saturado o residual.

Materiales:

• Pipeta y puntas de pipeta.
• Cubetas de espectrofotometria.
• Tubos de ensayo
• Espectrofotómetro
• Centrífuga

Reactivos:

• Reactivo 5 (Solución saturante: solución de hierro)

• Reactivo 6 (Agente precipitante: magnesio carbonato)

• Reactivo 3 (Para determinación de Fe sérico)

• Iron Cal (Para determinación de Fe sérico)

• Reactivo de trabajo (Reactivo 1 + Reactivo 2: Para determinación de Fe sérico)

Procedimiento:

1. Preparamos en los tubos: 500 microlitros de muestra + 1000 microlitros de R5 (solución saturante)

2. Mezclamos bien e incubar 10 min a Tª ambiente (15-25ºC)

3. Añadimos a cada tubo: 3 dosis de R6 (Agente precipitante)

4. Mezclamos bien e incubar 10 min a Tª ambiente.

5. Centrifugamos 15 min a 3000 r.p.m

6. Recogemos el sobrenadante cuidadosamente y lo procesamos como una muestra para la determinación de hierro.

7. Una vez que tenemos el sobrenadante que va a ser nuestra muestra, realizamos la práctica del hierro sérico:

8. A continuación, leemos las absorbancias del Patrón y la muestra frente al Blanco de reactivo

Resultado:

Una vez hecho toda la práctica la lectura nos a dado los siguientes datos:

• Blanco de Reactivo = 0
• Blanco de Muestra = 0,022
• Patrón = 0,068

• Muestra = 0,071

Con estos datos hacemos los cálculos pertinentes, que son:

[0,071 (Muestra) - 0'022 (Blanco muestra) / 0'068 (Patrón)] x 100 = 72,06 µg/dl

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